实 习 报 告
题 目：草莓的组织培养与相关培养基的制备
学 院： 植物保护学院
专业 班级： 动植物检疫专0402班
学 号： 20xx033020203
学生 姓名： 陈 英 化
指导 教师： 赵 岩
二〇〇 七 年 六 月 一 日
草莓的组织培养与相关培养基的制备
本次实习主要是学习草莓培养基的制备和草莓的组织培养法，为以后从事草莓方面的工作与研究打基础
1 材料和方法：
1.1 供试植物材料：
草莓品种：（1）童子Ⅰ号： 取自河北农业大学草莓试验田
（2）达塞莱克特：取自河北农业大学草莓试验田
1.2 草莓组培苗的繁殖：
1.2.1 MS培养基的制备
（一）母液的配制：（参见附录一、二）
（1）1mol·L-1 酸碱配制：称取4gNaOH，溶解后定容于100ml去离子水中，即配成1mol·L-1NaOH溶液；量取8.4ml浓盐酸（12 mol·L-1），加去离子水定容至100ml，即配成1mol·L-1的盐酸溶液。
（2）大量元素母液配制（H4NO3、KNO3、KH2PO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O）一定要分别称量，分别溶解，再定容。倒入贮液瓶中，贴好标签（日期、种类、倍数），放入冰箱内（2~4℃）或常温。
（3）微量元素母液配制（MnSO4·4H2O（MnSO4·H2O）、ZnSO4·7H2O、H3BO3 、KI、Na2MoO4·2H2O、CoCl2·6H2O、CuSO4·5H2O）分别称量，分别溶解（用蒸馏水或去离子水），定容。贴标签（日期、种类、倍数），放入冰箱内（2~4℃）或常温。
（4）铁盐母液配制（FeSO4·7H2O、Na2EDTA）：5.57ｇ硫酸亚铁和7.45ｇ乙二胺四乙酸钠，分别用450ml去离子水（或蒸馏水）溶解，分别适当加热并不停搅拌，待分别溶解后，再将2种溶液混合在一起，调整PH值到5.5，最后加蒸馏水或去离子水定容于1000ml，倒入棕色瓶中，贴好标签放入冰箱保存。
（5）有机物母液配制：（肌醇、烟酸（VB3烟酸胺素（VB1）、烟酸吡多醇（VB6）、甘氨酸）称量，分别溶解，用蒸馏水或去离子水定容，放入细口瓶中备用，贴好标签放入冰箱保存。
（6）配制0.2mg·L-1BA（6-苄基氨基嘌呤）：称20mg加少量1mol·L-1的盐酸溶解，然后用加热的蒸馏水定容100ml，配制1L培养基吸取量为1ml。
（7）配制0.5mg·L-1 IBA（吲哚丁酸）：称50mg加少量95％乙醇溶解，然后用加热的蒸馏水定容100ml，配制1L培养基吸取量为1ml 。
（二）培养基的配制：
（1）称蔗糖（分化培养基用30ｇ；生根培养基用20ｇ）、琼脂5ｇ用凉水调成糊状。
（2）取一定量的去离子水或自来水（一般是培养基量的80％～90％），加入不锈钢锅内，用电磁炉加热。母液依次按NH4NO3、KNO3、KH2PO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O；MnSO4·4H2O（MnSO4·H2O）、ZnSO4·7H2O、H3BO3 、KI、Na2MoO4·2H2O、CoCl2·6H2O、CuSO4·5H2O；FeSO4·7H2O、Na2EDTA；肌醇、烟酸（VB3）、烟酸胺素（VB1）、烟酸吡多醇（VB6）、甘氨酸顺序吸取。
（3）水开后，加入蔗糖和琼脂，不断搅拌，开锅后停止加热。
（4）将量取好的母液倒入上述已加热的锅内，不断搅拌，使其均匀溶解。
（5）定容（考虑由温度引起的体积变化）
（6）调整培养基的PH值为5.8～6.0（用1mol·L-1NaOH溶液和1mol·L-1的盐酸溶液）。
（7）培养基的分装每40ml装入100ml三角瓶，用封口膜封瓶口，再用牛皮纸将瓶口包扎，对培养基及时做好标记。
（8）培养基的灭菌和保存：在压力表达0.105～0.120MPa时，灭菌20min，放置2～3d进行观察，若无污染迹象则可使用［3］。
（9）分化培养基：MS培养基，附加BA 0.5mg·L-1，蔗糖30g，琼脂5g；生根培养基1/2MS+IBA0.5mg·L-1+蔗糖20g+琼脂5g。
1.2.2 外植体的生长与分化
取匍匐茎顶梢剪去叶片，在自来水下冲洗干净，取出已长出的小叶。在超净工作台上，用70％酒精杀菌30s，用无菌水冲洗3次（3min/次），再用0.1%升汞泡7~8min，用无菌水冲洗3~5次（5~10min/次）。用无菌尖头镊子将匍匐茎茎尖外面的包叶剥去，用镊子将幼叶一一剥去，切取尽可能小的茎尖（0.1~0.3mm），置于分化培养基中（MS培养基，附加BA 0.5mg·L-1，蔗糖30g，琼脂5g）于光照度3000 lx，光周期8~10h，温度20~28℃条件下培养20d左右［1］。
1.2.3 试管苗的生根
取40mlMS生根培养基（1/2MS+IBA0.5mg·L-1+蔗糖20g+琼脂5g）置于100ml三角瓶中，每瓶接种4株长势基本相同的试管苗，于光照4000 lx，光周期14h，温度20~27℃条件下培养约30d［2］。
参 考 文 献
[1] 牛建新，鲁晓燕，于艳华．外植体和培养因子对草莓不定芽诱导的影响［J］．北方园艺，1999，3：30～31．
[2] 甄文超，曹克强，代 丽，等．连作草莓根系分泌物自毒作用的模拟研究［J］．植物生态学报，20xx，28(6)：828～832．
[3] 李 云 主编，林果花菜组织培养快速育苗技术［M］．中国林业出版社．20xx．6．
[4] 沈德绪．果树育种学［M］．上海：上海科学技术出版社，1980．
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